В результате комплексного морфологического исследования слизистой оболочки верхнечелюстной пазухи при
одонтогенных грибковых синуситах выявлены признаки гранулематозного воспаления. Происходила метаплазия
однорядного кубического или призматического эпителия. Эпителиоциты обладали сниженными белок-синтетической и пластической функциями.
В последние годы наблюдается значительный рост заболеваемости одонтогенными верхнечелюстными синуситами, вызванными грибковой флорой. Наряду с предрасполагающими факторами (длительный прием антибиотиков, стероидных препаратов, сахарный диабет, иммунодефицитные состояния) важное значение для развития микозов имеет выведение пломбировочных материалов в верхнечелюстную пазуху. В современной классификации выделено 5 форм грибковых заболеваний околоносовых пазух: острый инвазивный риносинусит, хронический инвазивный риносинусит, гранулематозный инвазивный риносинусит, грибковый шар (мицетома,
или аспергиллема), неинвазивный (аллергический) грибковый синусит. Наиболее распространенная форма микоза верхнечелюстных пазух (ВЧП) — грибковое тело. Возбудителями заболеваний этой группы являются условно-патогенные плесневые грибы рода Aspergillus. Установлено, что оксид цинка и сульфат бария, содержащиеся в пломбировочных материалах для корневых каналов, снижают функцию ресничек мерцательных клеток, нарушают мукоцилиарный клиренс и становятся питательной средой для пролиферации и метаболизма грибов рода Aspergillus. Микозам одонтогенного происхождения посвящены отдельные публикации, однако вопросы их патоморфоза остаются малоизученными. Особую актуальность приобретает комплексное морфологическое исследование слизистой оболочки (СО) ВЧП приодонтогенных грибковых неинвазивных синуситах, позволяющее выяснить патогенез развития патологического процесса, что важно для лечения и прогноза заболевания.
Целью исследования было оценить структурно-функциональные изменения СО ВЧП при неивазивных формах одонтогенного грибкового синусита.
Материал и методы
С 2000 по 2010 г. обследованы 116 больных с диагнозом «хронический одонтогенный грибковый синусит» в
возрасте от 18 до 42 лет (в среднем — 29,18±3,42 года). Диагноз основывался на данных клинических, лучевых, эндоскопических и микробиологических исследований. У 14 пациентов с обнаруженным в пазухе грибковым телом и микробиологически верифицированным диагнозом «аспергиллема» проведено комплексное морфологическое исследование СО ВЧП. Контрольная группа представлена биоптатами визуально неизмененной СО ВЧП, полученными в ходе оперативных вмешательств по поводу ретенционных кист у 6 пациентов в возрасте от 17 до 26 лет (в среднем — 23,83±2,51 года). Биопсийный материал был получен в соответствии с требованиями этического комитета и с письменного согласия пациентов.
Для световой микроскопии и иммуногистохимического исследования фрагменты СО фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 1 сут и заливали в парафин. Срезы толщиной 5—7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, ставили PAS-реакцию. В полученных препаратах изучали состояние эпителия, с помощью окуляр-микрометра измеряли толщину базальной мембраны. В 1 мм2 собственной пластинки СО ВЧП определяли численную плотность клеточных элементов (лимфоцитов, макрофагов, плазмоцитов). Методом иммуногистохимического типирования с использованием пероксидазной метки при помощи моноклональных антител («DAKO», Дания) выявляли CD3 (общие Т-лимфоциты), CD4 (Т-хелперы), CD8 (Т-супрессоры), CD20 (В-лимфоциты) и определяли степень экспрессии муромидазы (Mur) в СО ВЧП. В качестве хромогена применяли диаминобензидин и докрашивали гематоксилином. Подсчитывали содержание клеток CD3, CD4, CD8, CD20 по отношению к окрашенным клеткам в собственной пластинке СО ВЧП (в %). Экспрессию Mur оценивали по трехбалльной шкале (слабая, средняя и выраженная степень). Для оценки выраженности экспрессии Mur определяли процент клеток, имеющих рецепторы, показатель экспрессии.
Для электронно-микроскопического исследования материал фиксировали в 4% растворе параформальдегида, дофиксировали в 1% растворе четырехокиси осмия, дегидратировали в этиловых спиртах восходящей концентрации и заключали в смесь эпона и аралдита. Полутонкие и ультратонкие срезы готовили на ультратоме Ultrotome III («LKB», Швеция). Полутонкие срезы толщиной 1 мкм окрашивали 1% раствором азура II и исследовали под световым микроскопом. Ультратонкие срезы толщиной 60—100 нм наносили на сетки-подложки с формваровой пленкой-подложкой и контрастировали 2% раствором уранилацетата и цитратом свинца. Препараты просматривали в электронном микроскопе JEM-100 CXII («JEOL», Япония) с апертурной диафрагмой 25—30 мкм при ускоряющем напряжении 80 кВ.
Статистическую обработку результатов производили с помощью пакета программ Statistica 6.0 for Windows. Данные анализировали с использованием непараметрического критерия Манна—Уитни. Результаты представлены в виде М±m, где М — среднее значение, m — ошибка среднего значения. Для оценки взаимосвязи между параметрами использовали коэффициент корреляции Спирмена.
Результаты и обсуждение
В контрольной группе СО ВЧП выстлана многорядным реснитчатым эпителием, среди клеток которого определялись реснитчатые, бокаловидные и базальные. Отличительными особенностями биоптатов с аспергиллемами ВЧП явились атрофия, гидропическая дистрофия эпителиоцитов, выраженные плазморрагии, отек и истончение собственной пластинки СО ВЧП. Отмечалось уменьшение высоты эпителиоцитов или их уплощение. Зачастую эпителий не представлял единого пласта (рис. 1).
Рис. 1. Эпителий СО ВЧП пациентки с грибковым одонтогенным синуситом. Ув. 2000.
На некоторых участках он имел вид многорядного мерцательного. При электронно-микроскопическом исследовании выявляли эпителиоциты эндотелиоподобной или призматической формы без признаков специализации на реснитчатые или бокаловидные клетки. В электронно-прозрачной цитоплазме определялись единичные митохондрии, короткие цистерны гранулярной эндоплазматической сети, малое число рибосом. В базальной части цитоплазмы располагалось овальной или неправильной формы эухромное ядро с тонкой маргинальной полоской гетерохроматина. Кариолемма образовывала неглубокие инвагинации. В подъядерной зоне визуализировались тонкие пучки тонофиламентов (рис. 2).
Рис. 2. Фрагмент эпителиоидной клетки в собственной пластинке СО ВЧП пациентки с грибковым одонтогенным синуситом. Ув. 4000.
Таким образом, для эпителиоцитов характерны снижение белок-синтетической и пластической функции и как
следствие — слабая репаративная активность. Базальная мембрана — извилистая, местами гиалинизирована, на всем протяжении неравномерно утолщена (11,34±2,17мкм, в контроле — 2,05±0,76 мкм; p<0,05), что может быть следствием как усиленного фибробластического процесса, так и отека, возникающего в ходе воспаления.
Содержание клеточных элементов, CD3, CD4, CD8, CD20 и экспрессия Mur в собственной пластинке СО ВЧП при грибковых синуситах (M±m)
Клеточная инфильтрация в собственной пластинке в целом имела диффузный характер и была представлена
мононуклеарными клетками с преобладанием макрофагов, лимфоцитов и плазмоцитов (см. таблицу), на долю
которых в среднем приходилось 71,2% всех клеточных элементов. Макрофаги рассредоточены по всей строме, интра- и периваскулярно образовывали небольшие агрегаты. Среди клеток макрофагального ряда определялись эпителиоидные клетки. Лимфоциты в 100% случаев формировали крупные инфильтраты, расположенные вокруг подэпителиальных венозных сосудов. Анализ субпопуляций лимфоцитов показал преобладание CD3 над CD20 и CD4+ над CD8+ (см. таблицу). Соотношение CD4/CD8 составило 2,05:1 (в контроле — 2,7:1), что свидетельствует о снижении защитной функции СО. Между Т-лимфоцитами и макрофагами существуют реципрокные связи. Т-хелперы способны вырабатывать интерферон-γ, который активирует макрофаги. Взаимодействие между макрофагами и лимфоцитами нашло отражение в повышении числа этих клеток в собственной пластинке СО ВЧП и наличии положительной корреляционной связи между содержанием этих клеточных популяций (r=0,52, p=0,0007). Активированные макрофаги обладают цитотоксическими свойствами, обусловленными кислородными радикалами, факторами некроза опухоли-α, протеазами и муромидазой. Это подтверждается тем, что экспрессия муромидазы выявлялась преимущественно в макрофагах и эпителиоидных клетках (рис. 3).
Рис 3. Экспрессия муромидазы в клетках макрофагального ряда в СО ВЧП у пациента с грибковым одонтогенным синуситом. Окраска с использованием анти-Mur-антител, диаминобензидином и гематоксилином. Об. 63, ок. 10.
Таким образом, доминирующими процессами в СО ВЧП при грибковых синуситах являются специфическое
гранулематозное воспаление, которое вызывают экзотоксины грибов, и реакции на повреждение эпителия в виде однослойной метаплазии, снижения физиологических барьерных функций.
Авторы: О.Д. Байдик, д.м.н.
проф. П.Г. Сысолятин, д.м.н.
проф. С.В. Логвинов, д.м.н.
проф. Н.Л. Елизарьева
Сибирский государственный медицинский университет, Томск
Новосибирский государственный медицинский университет Росздрава, Новосибирск
В результате комплексного морфологического исследования слизистой оболочки верхнечелюстной пазухи при
одонтогенных грибковых синуситах выявлены признаки гранулематозного воспаления. Происходила метаплазия
однорядного кубического или призматического эпителия. Эпителиоциты обладали сниженными белок-синтетической и пластической функциями.
В последние годы наблюдается значительный рост заболеваемости одонтогенными верхнечелюстными синуситами, вызванными грибковой флорой. Наряду с предрасполагающими факторами (длительный прием антибиотиков, стероидных препаратов, сахарный диабет, иммунодефицитные состояния) важное значение для развития микозов имеет выведение пломбировочных материалов в верхнечелюстную пазуху. В современной классификации выделено 5 форм грибковых заболеваний околоносовых пазух: острый инвазивный риносинусит, хронический инвазивный риносинусит, гранулематозный инвазивный риносинусит, грибковый шар (мицетома,
или аспергиллема), неинвазивный (аллергический) грибковый синусит. Наиболее распространенная форма микоза верхнечелюстных пазух (ВЧП) — грибковое тело. Возбудителями заболеваний этой группы являются условно-патогенные плесневые грибы рода Aspergillus. Установлено, что оксид цинка и сульфат бария, содержащиеся в пломбировочных материалах для корневых каналов, снижают функцию ресничек мерцательных клеток, нарушают мукоцилиарный клиренс и становятся питательной средой для пролиферации и метаболизма грибов рода Aspergillus. Микозам одонтогенного происхождения посвящены отдельные публикации, однако вопросы их патоморфоза остаются малоизученными. Особую актуальность приобретает комплексное морфологическое исследование слизистой оболочки (СО) ВЧП приодонтогенных грибковых неинвазивных синуситах, позволяющее выяснить патогенез развития патологического процесса, что важно для лечения и прогноза заболевания.
Целью исследования было оценить структурно-функциональные изменения СО ВЧП при неивазивных формах одонтогенного грибкового синусита.
Материал и методы
С 2000 по 2010 г. обследованы 116 больных с диагнозом «хронический одонтогенный грибковый синусит» в
возрасте от 18 до 42 лет (в среднем — 29,18±3,42 года). Диагноз основывался на данных клинических, лучевых, эндоскопических и микробиологических исследований. У 14 пациентов с обнаруженным в пазухе грибковым телом и микробиологически верифицированным диагнозом «аспергиллема» проведено комплексное морфологическое исследование СО ВЧП. Контрольная группа представлена биоптатами визуально неизмененной СО ВЧП, полученными в ходе оперативных вмешательств по поводу ретенционных кист у 6 пациентов в возрасте от 17 до 26 лет (в среднем — 23,83±2,51 года). Биопсийный материал был получен в соответствии с требованиями этического комитета и с письменного согласия пациентов.
Для световой микроскопии и иммуногистохимического исследования фрагменты СО фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 1 сут и заливали в парафин. Срезы толщиной 5—7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, ставили PAS-реакцию. В полученных препаратах изучали состояние эпителия, с помощью окуляр-микрометра измеряли толщину базальной мембраны. В 1 мм2 собственной пластинки СО ВЧП определяли численную плотность клеточных элементов (лимфоцитов, макрофагов, плазмоцитов). Методом иммуногистохимического типирования с использованием пероксидазной метки при помощи моноклональных антител («DAKO», Дания) выявляли CD3 (общие Т-лимфоциты), CD4 (Т-хелперы), CD8 (Т-супрессоры), CD20 (В-лимфоциты) и определяли степень экспрессии муромидазы (Mur) в СО ВЧП. В качестве хромогена применяли диаминобензидин и докрашивали гематоксилином. Подсчитывали содержание клеток CD3, CD4, CD8, CD20 по отношению к окрашенным клеткам в собственной пластинке СО ВЧП (в %). Экспрессию Mur оценивали по трехбалльной шкале (слабая, средняя и выраженная степень). Для оценки выраженности экспрессии Mur определяли процент клеток, имеющих рецепторы, показатель экспрессии.
Для электронно-микроскопического исследования материал фиксировали в 4% растворе параформальдегида, дофиксировали в 1% растворе четырехокиси осмия, дегидратировали в этиловых спиртах восходящей концентрации и заключали в смесь эпона и аралдита. Полутонкие и ультратонкие срезы готовили на ультратоме Ultrotome III («LKB», Швеция). Полутонкие срезы толщиной 1 мкм окрашивали 1% раствором азура II и исследовали под световым микроскопом. Ультратонкие срезы толщиной 60—100 нм наносили на сетки-подложки с формваровой пленкой-подложкой и контрастировали 2% раствором уранилацетата и цитратом свинца. Препараты просматривали в электронном микроскопе JEM-100 CXII («JEOL», Япония) с апертурной диафрагмой 25—30 мкм при ускоряющем напряжении 80 кВ.
Статистическую обработку результатов производили с помощью пакета программ Statistica 6.0 for Windows. Данные анализировали с использованием непараметрического критерия Манна—Уитни. Результаты представлены в виде М±m, где М — среднее значение, m — ошибка среднего значения. Для оценки взаимосвязи между параметрами использовали коэффициент корреляции Спирмена.
Результаты и обсуждение
В контрольной группе СО ВЧП выстлана многорядным реснитчатым эпителием, среди клеток которого определялись реснитчатые, бокаловидные и базальные. Отличительными особенностями биоптатов с аспергиллемами ВЧП явились атрофия, гидропическая дистрофия эпителиоцитов, выраженные плазморрагии, отек и истончение собственной пластинки СО ВЧП. Отмечалось уменьшение высоты эпителиоцитов или их уплощение. Зачастую эпителий не представлял единого пласта (рис. 1).
Рис. 1. Эпителий СО ВЧП пациентки с грибковым одонтогенным синуситом. Ув. 2000.
На некоторых участках он имел вид многорядного мерцательного. При электронно-микроскопическом исследовании выявляли эпителиоциты эндотелиоподобной или призматической формы без признаков специализации на реснитчатые или бокаловидные клетки. В электронно-прозрачной цитоплазме определялись единичные митохондрии, короткие цистерны гранулярной эндоплазматической сети, малое число рибосом. В базальной части цитоплазмы располагалось овальной или неправильной формы эухромное ядро с тонкой маргинальной полоской гетерохроматина. Кариолемма образовывала неглубокие инвагинации. В подъядерной зоне визуализировались тонкие пучки тонофиламентов (рис. 2).
Рис. 2. Фрагмент эпителиоидной клетки в собственной пластинке СО ВЧП пациентки с грибковым одонтогенным синуситом. Ув. 4000.
Таким образом, для эпителиоцитов характерны снижение белок-синтетической и пластической функции и как
следствие — слабая репаративная активность. Базальная мембрана — извилистая, местами гиалинизирована, на всем протяжении неравномерно утолщена (11,34±2,17мкм, в контроле — 2,05±0,76 мкм; p<0,05), что может быть следствием как усиленного фибробластического процесса, так и отека, возникающего в ходе воспаления.
Содержание клеточных элементов, CD3, CD4, CD8, CD20 и экспрессия Mur в собственной пластинке СО ВЧП при грибковых синуситах (M±m)
Клеточная инфильтрация в собственной пластинке в целом имела диффузный характер и была представлена
мононуклеарными клетками с преобладанием макрофагов, лимфоцитов и плазмоцитов (см. таблицу), на долю
которых в среднем приходилось 71,2% всех клеточных элементов. Макрофаги рассредоточены по всей строме, интра- и периваскулярно образовывали небольшие агрегаты. Среди клеток макрофагального ряда определялись эпителиоидные клетки. Лимфоциты в 100% случаев формировали крупные инфильтраты, расположенные вокруг подэпителиальных венозных сосудов. Анализ субпопуляций лимфоцитов показал преобладание CD3 над CD20 и CD4+ над CD8+ (см. таблицу). Соотношение CD4/CD8 составило 2,05:1 (в контроле — 2,7:1), что свидетельствует о снижении защитной функции СО. Между Т-лимфоцитами и макрофагами существуют реципрокные связи. Т-хелперы способны вырабатывать интерферон-γ, который активирует макрофаги. Взаимодействие между макрофагами и лимфоцитами нашло отражение в повышении числа этих клеток в собственной пластинке СО ВЧП и наличии положительной корреляционной связи между содержанием этих клеточных популяций (r=0,52, p=0,0007). Активированные макрофаги обладают цитотоксическими свойствами, обусловленными кислородными радикалами, факторами некроза опухоли-α, протеазами и муромидазой. Это подтверждается тем, что экспрессия муромидазы выявлялась преимущественно в макрофагах и эпителиоидных клетках (рис. 3).
Рис 3. Экспрессия муромидазы в клетках макрофагального ряда в СО ВЧП у пациента с грибковым одонтогенным синуситом. Окраска с использованием анти-Mur-антител, диаминобензидином и гематоксилином. Об. 63, ок. 10.
Таким образом, доминирующими процессами в СО ВЧП при грибковых синуситах являются специфическое
гранулематозное воспаление, которое вызывают экзотоксины грибов, и реакции на повреждение эпителия в виде однослойной метаплазии, снижения физиологических барьерных функций.
Авторы: О.Д. Байдик, д.м.н.
проф. П.Г. Сысолятин, д.м.н.
проф. С.В. Логвинов, д.м.н.
проф. Н.Л. Елизарьева
Сибирский государственный медицинский университет, Томск
Новосибирский государственный медицинский университет Росздрава, Новосибирск
Читайте также:
Статьи от брендов
0 комментариев