Изучалась эффективность плазмолифтинга на модели экспериментального пародонтита у крыс линии Вистар. Показанно, что у животных с инициированным пародонтитом десна цианотичная, со значительным отеком вокруг исследуемых зубов, ее свободный край неровный, визуализировался пародонтальный карман, отмечалась инфильтрация тканей лейкоцитами, макрофагами, фибробластами, утолщение слоя эпителия десны, разрушение периодонта и резорбция костных балок альвеол. Лечебный эффект плазмолифтинга и стандартной терапии проявлялся уменьшением фибринозных наложений, санацией пародонтального кармана, формированием вторичного пародонтального прикрепления. Отмечалось ограничение зоны инфильтрации. Однако терапевтический эффект плазмолифтинга был более выраженным.
Рекрутированные в очаг воспаления лейкоциты, осуществляя борьбу с патогеном, не только вызывают развитие вторичной альтерации, но и имеют возможность изменять функциональную активность эндотелиоцитов.
Основной целью нехирургического лечения пародонтита является не только достижение длительного контроля над воспалительным процессом, а и восстановление тканей пародонта, обусловленное сформированным новым соединительнотканным прикреплением, в том числе, за счет образования нового функционального цемента с встраиванием новых коллагеновых волокон в ту часть поверхности корня, на которой отсутствует периодонтальная связка. В основе лечения плазмой, содержащей тромбоциты (PRP) лежат следующие механизмы:
- участие в распознавании патогенов,
- снижение адгезии патогенных пародонтальных бактерий,
- выделение белков, способных подавлять активность бактерий и грибов,
- активация антитело-зависимой клеточной цитотоксичности,
- привлечение и моделирование функции лейкоцитов,
- выделение белыми кровяными тельцами факторов роста (фактор роста тромбоцитов (PDGF), трансформирующий фактор роста (TGF-β) и инсулиноподобный фактор роста (IGF-I)). Факторы роста регулируют биологическую активность, включая пролиферацию, адгезию, миграцию и клеточную дифференцировку в первую очередь мезенхимальных клеток в костной и соединительной ткани.
Выяснение молекулярных механизмов, ответственных за разрушение пародонта необходимо для поиска перспективных терапевтических подходов, направленных на модулирование реакции хозяина при хроническом пародонтите.
Цель исследования: оценить противовоспалительные эффекты плазмолифтинга в модели экспериментального пародонтита у крыс.
Материалы и методы исследования
Экспериментальный пародонтит формировали у крыс породы Wistar с начальной средней массой 219,83 г. Животные были отобраны в соответствии с критериями включения (самец, порода крыс породы Вистар, вес 200–300 г, возраст 18–20 недель). Критерием исключения являлись видимые признаки болезни животного. Животные получали свободный доступ к пище и воде. Это исследование проводилось в условиях 12-часового цикла свет-темнота при 23 ± 3◦C (с 8:00 до 20:00), влажность 55 ± 15%, освещение при от 150 до 300 люкс. Эксперименты на животных проводились в соответствии с национальными рекомендациями для ухода и использования лабораторных животных, одобренных Комитетом по этике животных.
Животные были разделены на четыре группы по 10 особей в каждой группе: три опытные и одна контрольная группа. Все три группы получали одинаковый режим содержания и кормления.
Первая опытная группа – животные с экспериментальным пародонтитом, не получающие терапии.
Вторая опытная группа – животные с экспериментальным пародонтитом, получающие инъекции плазмы (3 инъекции через 3 суток каждая). У животных проводили забор крови из подключичной вены в количестве 1 мл, центрифугировали 10 минут при 1500 об/мин, отбирали плазму, содержащую тромбоциты.
Третья опытная группа – животные с экспериментальным пародонтитом, с применением пленок фирмы «Диплен» с активными действующими компонентами «Метронидазолом» и «Хлоргексидином». Рассматриваемые пленки имеют гидрофильную и гидрофобную поверхности. При прикреплении пленки гидрофильной поверхностью последняя плотно прилегает к слизистой оболочке. Впоследствии данные пленки постепенно рассасывались. Курс процедур составлял 10 дней.
У животных контрольной группы, второй и третьей опытных групп была также забрана кровь, а в пародонт были сделаны инъекции физиологического раствора с использованием той же техники и дозировки, что и у субъектов второй опытной группы для исключения влияния стресса, вызванного во время забора крови или процедуры введения инъекций.
Пародонтит моделировали путем отслойки десны концом копьевидного скальпеля (№ 11) в сочетании с инъекциями 10% раствора этилового спирта с 0,25% раствором новокаином в течении 7 дней.
Животных проверяли на наличие воспалительного процесса один раз в 10 дней. Оценка состояния пародонта оценивалась по следующим критериям:
0 – нормальная десна;
1 балл – легкое воспаление, небольшой отек, незначительное изменение цвета, отсутствие кровотечения при зондировании;
2 балла – умеренное воспаление, отек, шелушение, покраснение и кровоточивость при зондировании;
3 балла – тяжелое воспаление, сильное покраснение, наличие язв, отек и сильное кровотечение.
Подвижность зубов оценивали по следующим критериям:
0 – нет подвижности;
1 балл – небольшая подвижность (вестибулярно-небная);
2 балла – тяжелая подвижность (вестибулярно-небная и мезиально-дистальная);
3 балла – сильная подвижность (вертикальная, зуб перемещается в розетку и из розетки).
Ткани экспериментальных животных фиксировали в 4% формальдегиде (pH 7,5) в течение ночи при 4◦C, а затем переносили в декальцинирующий раствор с 0,5 М ЭДТА-Na (рН 7,5–8,0) на 4 недели, затем заливали их в парафин и делали срезы. Гистологические срезы делались на уровне резцов обеих челюстей и окрашивались гематоксилин-эозином и методом Ван-Гизона.
Таблица 1. Гистологические критерии оценки воспаления пародонта
|
Оценка |
Степень поражения |
|
0 (отсутствие) баллов |
Нет |
|
1 (незначительная) балл |
Незначительная гиперплазия десневого эпителия и воспалительная клеточная инфильтрация. Нет существенные изменений в пародонтальной связки или пародонтальном кармане |
|
2 (легкая) балла |
Легкая гиперплазия десневого эпителия и воспаление. Небольшое нарушение пародонтальной связки. |
|
3 (умеренная) балла |
Эрозия и изъязвление десневого эпителия и умеренная инфильтрация воспалительными клетками. |
|
4 (тяжелая) балла |
Эрозия и изъязвление десневого эпителия и сильное воспаление. |
Статистическая обработка данных проводилась с использованием однофакторного дисперсионного анализа Крускал-Уолисса. Результаты в таблицах представлены как среднее (М), и среднеквадратичное отклонение (SD). Достоверность различий между группами (р) оценивали при помощи попарных сравнений Двасса-Стила-Кричлоу-Флигнера.
Результаты исследования
Ткани пародонта контрольной группы животных не имели ни клинических, ни гистологических изменений.
В первые сутки моделирования пародонтита ткани десны экспериментальных групп имели нормальный вид, гладкую консистенцию, светло-розовый цвет. Прикрепленная десна была прочно прикреплена к подлежащим структурам, в то время как свободный край десны имел четкий контур, повторяющий цементно-эмалевое соединение соседних зубов. На десятые сутки эксперимента клинический вид десны изменился – макроскопический вид в месте хронической механической травмы стал цианотичным, со значительным отеком вокруг исследуемых зубов. Свободный край десны стал неровным, появились остатки пищи.
Гистологически наблюдалось наличие пародонтального кармана, инфильтрация тканей лейкоцитами, макрофагами, фибробластами, утолщение слоя эпителия десны, разрушение периодонта и резорбция костных балок альвеол (рис. 2).
Рисунок 1. Пародонт на первые сутки эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином; увеличение Х400.
Рисунок 2. Пародонт на десятые сутки эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином; увеличение Х400.
Лечебный эффект и плазмолифтинга, и стандартной терапии проявлялся уменьшением фибринозных наложений, санацией пародонтального кармана, формированием вторичного пародонтального прикрепления. Отмечалось ограничение зоны инфильтрации. Однако терапевтический эффект плазмолифтинга был более выраженным (табл. 2).
Таблица 2. Гистологическая и клиническая оценка воспаления пародонта, М±SD
|
Показатели/группы |
Клиническая оценка воспалительного процесса, баллы |
Подвижность зубов, баллы |
Гистологическая оценка воспалительного процесса, баллы |
|
Контрольная группа |
0±0 |
0±0 |
0±0 |
|
Первая опытная группа до начала терапии |
2,89±0,61 р1=0,016 |
1,82±0,20 р1=0,016 |
2,95±0,22 р1=0,015 |
|
Первая опытная группа через 10 дней от начала терапии |
0,19±0,13 р1=0,011 р3=0,005 |
0,79±0,52 р1=0,011 р3=0,005 |
1,05±0,32 р1=0,01 р3=0,005 |
|
Вторая опытная до начала терапии |
2,90±0,57 р1=0,016 |
1,82±0,21 р1=0,016 |
2,97±0,20 р1=0,016 |
|
Третья опытная группа через 10 дней от начала терапии |
1,88±0,22 р1=0,012 р2=0,003 р3=0,016 |
1,51±0,17 р1=0,013 р2=0,008 р3=0,076 |
1,46±0,23 р1=0,011 р2=0,084 р3=0,007 |
|
Тест Крускал-Уоллиса |
Χ2=40,1, р<0,001 |
Χ2=37,1,р<0,001 |
Χ2=40,7, р<0,001 |
Примечание: р1 – уровень статистической значимости различий по сравнению с группой контроля, р2 – по сравнению с группой животных с экспериментальным пародонтитом, получающих плазмолифтинг, р3 – по сравнению с началом и окончанием терапии.
Крысы не страдают пародонтитом, поэтому методы индуцирования пародонтита у этого вида животных требуют или бактериальной инокуляции, или механического повреждения путем наложения лигатуры или как в нашем случае – отслойки пародонта, что приводит к воспалению десен и, в конечном итоге, к потере костной массы.
Основными компонентами богатой тромбоцитами плазмы являются: факторы роста, лейкоциты, фагоциты, нативный фибриноген, вазоактивные и хемотаксические агенты, а также высокая концентрация тромбоцитов. Концентрация тромбоцитов в ней в 3-4 раза выше концентрации по сравнению с их числом в кровотоке. Так, количество тромбоцитов в полученной плазме может превышать 2 000 000 в 1 мкл, в то время как нормальная концентрация тромбоцитов в крови составляет от 150 000 до 350 000 в 1 мкл.
Тромбоциты, выделяя факторы роста, привлекают недифференцированные мезенхимальные клетки в зону воспаления и активируя пролиферацию предшественников соединительной ткани, стимулируя активность фибробластов и остеобластов, а также ангиогенез, улучшают процесс заживления.
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что плазмолифтинг снижает воспалительную реакцию тканей, уменьшает подвижность зубов при экспериментальном пародонтите, что может быть опосредовано его противовоспалительными свойствами и влиянием на костный метаболизм.
Авторы: Фефелов А.А., Цыбиков Н.Н., Фефелова Е.В. (Краевая стоматологическая поликлиника г. Чита, ЧГМА, Россия)
Авторы:
Фефелов Александр Александрович
Веду прием: Краевая стоматологическая поликлиника (Чита)
Врач-стоматолог хирург, пародонтолог.
Изучалась эффективность плазмолифтинга на модели экспериментального пародонтита у крыс линии Вистар. Показанно, что у животных с инициированным пародонтитом десна цианотичная, со значительным отеком вокруг исследуемых зубов, ее свободный край неровный, визуализировался пародонтальный карман, отмечалась инфильтрация тканей лейкоцитами, макрофагами, фибробластами, утолщение слоя эпителия десны, разрушение периодонта и резорбция костных балок альвеол. Лечебный эффект плазмолифтинга и стандартной терапии проявлялся уменьшением фибринозных наложений, санацией пародонтального кармана, формированием вторичного пародонтального прикрепления. Отмечалось ограничение зоны инфильтрации. Однако терапевтический эффект плазмолифтинга был более выраженным.
Рекрутированные в очаг воспаления лейкоциты, осуществляя борьбу с патогеном, не только вызывают развитие вторичной альтерации, но и имеют возможность изменять функциональную активность эндотелиоцитов.
Основной целью нехирургического лечения пародонтита является не только достижение длительного контроля над воспалительным процессом, а и восстановление тканей пародонта, обусловленное сформированным новым соединительнотканным прикреплением, в том числе, за счет образования нового функционального цемента с встраиванием новых коллагеновых волокон в ту часть поверхности корня, на которой отсутствует периодонтальная связка. В основе лечения плазмой, содержащей тромбоциты (PRP) лежат следующие механизмы:
- участие в распознавании патогенов,
- снижение адгезии патогенных пародонтальных бактерий,
- выделение белков, способных подавлять активность бактерий и грибов,
- активация антитело-зависимой клеточной цитотоксичности,
- привлечение и моделирование функции лейкоцитов,
- выделение белыми кровяными тельцами факторов роста (фактор роста тромбоцитов (PDGF), трансформирующий фактор роста (TGF-β) и инсулиноподобный фактор роста (IGF-I)). Факторы роста регулируют биологическую активность, включая пролиферацию, адгезию, миграцию и клеточную дифференцировку в первую очередь мезенхимальных клеток в костной и соединительной ткани.
Выяснение молекулярных механизмов, ответственных за разрушение пародонта необходимо для поиска перспективных терапевтических подходов, направленных на модулирование реакции хозяина при хроническом пародонтите.
Цель исследования: оценить противовоспалительные эффекты плазмолифтинга в модели экспериментального пародонтита у крыс.
Материалы и методы исследования
Экспериментальный пародонтит формировали у крыс породы Wistar с начальной средней массой 219,83 г. Животные были отобраны в соответствии с критериями включения (самец, порода крыс породы Вистар, вес 200–300 г, возраст 18–20 недель). Критерием исключения являлись видимые признаки болезни животного. Животные получали свободный доступ к пище и воде. Это исследование проводилось в условиях 12-часового цикла свет-темнота при 23 ± 3◦C (с 8:00 до 20:00), влажность 55 ± 15%, освещение при от 150 до 300 люкс. Эксперименты на животных проводились в соответствии с национальными рекомендациями для ухода и использования лабораторных животных, одобренных Комитетом по этике животных.
Животные были разделены на четыре группы по 10 особей в каждой группе: три опытные и одна контрольная группа. Все три группы получали одинаковый режим содержания и кормления.
Первая опытная группа – животные с экспериментальным пародонтитом, не получающие терапии.
Вторая опытная группа – животные с экспериментальным пародонтитом, получающие инъекции плазмы (3 инъекции через 3 суток каждая). У животных проводили забор крови из подключичной вены в количестве 1 мл, центрифугировали 10 минут при 1500 об/мин, отбирали плазму, содержащую тромбоциты.
Третья опытная группа – животные с экспериментальным пародонтитом, с применением пленок фирмы «Диплен» с активными действующими компонентами «Метронидазолом» и «Хлоргексидином». Рассматриваемые пленки имеют гидрофильную и гидрофобную поверхности. При прикреплении пленки гидрофильной поверхностью последняя плотно прилегает к слизистой оболочке. Впоследствии данные пленки постепенно рассасывались. Курс процедур составлял 10 дней.
У животных контрольной группы, второй и третьей опытных групп была также забрана кровь, а в пародонт были сделаны инъекции физиологического раствора с использованием той же техники и дозировки, что и у субъектов второй опытной группы для исключения влияния стресса, вызванного во время забора крови или процедуры введения инъекций.
Пародонтит моделировали путем отслойки десны концом копьевидного скальпеля (№ 11) в сочетании с инъекциями 10% раствора этилового спирта с 0,25% раствором новокаином в течении 7 дней.
Животных проверяли на наличие воспалительного процесса один раз в 10 дней. Оценка состояния пародонта оценивалась по следующим критериям:
0 – нормальная десна;
1 балл – легкое воспаление, небольшой отек, незначительное изменение цвета, отсутствие кровотечения при зондировании;
2 балла – умеренное воспаление, отек, шелушение, покраснение и кровоточивость при зондировании;
3 балла – тяжелое воспаление, сильное покраснение, наличие язв, отек и сильное кровотечение.
Подвижность зубов оценивали по следующим критериям:
0 – нет подвижности;
1 балл – небольшая подвижность (вестибулярно-небная);
2 балла – тяжелая подвижность (вестибулярно-небная и мезиально-дистальная);
3 балла – сильная подвижность (вертикальная, зуб перемещается в розетку и из розетки).
Ткани экспериментальных животных фиксировали в 4% формальдегиде (pH 7,5) в течение ночи при 4◦C, а затем переносили в декальцинирующий раствор с 0,5 М ЭДТА-Na (рН 7,5–8,0) на 4 недели, затем заливали их в парафин и делали срезы. Гистологические срезы делались на уровне резцов обеих челюстей и окрашивались гематоксилин-эозином и методом Ван-Гизона.
Таблица 1. Гистологические критерии оценки воспаления пародонта
|
Оценка |
Степень поражения |
|
0 (отсутствие) баллов |
Нет |
|
1 (незначительная) балл |
Незначительная гиперплазия десневого эпителия и воспалительная клеточная инфильтрация. Нет существенные изменений в пародонтальной связки или пародонтальном кармане |
|
2 (легкая) балла |
Легкая гиперплазия десневого эпителия и воспаление. Небольшое нарушение пародонтальной связки. |
|
3 (умеренная) балла |
Эрозия и изъязвление десневого эпителия и умеренная инфильтрация воспалительными клетками. |
|
4 (тяжелая) балла |
Эрозия и изъязвление десневого эпителия и сильное воспаление. |
Статистическая обработка данных проводилась с использованием однофакторного дисперсионного анализа Крускал-Уолисса. Результаты в таблицах представлены как среднее (М), и среднеквадратичное отклонение (SD). Достоверность различий между группами (р) оценивали при помощи попарных сравнений Двасса-Стила-Кричлоу-Флигнера.
Результаты исследования
Ткани пародонта контрольной группы животных не имели ни клинических, ни гистологических изменений.
В первые сутки моделирования пародонтита ткани десны экспериментальных групп имели нормальный вид, гладкую консистенцию, светло-розовый цвет. Прикрепленная десна была прочно прикреплена к подлежащим структурам, в то время как свободный край десны имел четкий контур, повторяющий цементно-эмалевое соединение соседних зубов. На десятые сутки эксперимента клинический вид десны изменился – макроскопический вид в месте хронической механической травмы стал цианотичным, со значительным отеком вокруг исследуемых зубов. Свободный край десны стал неровным, появились остатки пищи.
Гистологически наблюдалось наличие пародонтального кармана, инфильтрация тканей лейкоцитами, макрофагами, фибробластами, утолщение слоя эпителия десны, разрушение периодонта и резорбция костных балок альвеол (рис. 2).
Рисунок 1. Пародонт на первые сутки эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином; увеличение Х400.
Рисунок 2. Пародонт на десятые сутки эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином; увеличение Х400.
Лечебный эффект и плазмолифтинга, и стандартной терапии проявлялся уменьшением фибринозных наложений, санацией пародонтального кармана, формированием вторичного пародонтального прикрепления. Отмечалось ограничение зоны инфильтрации. Однако терапевтический эффект плазмолифтинга был более выраженным (табл. 2).
Таблица 2. Гистологическая и клиническая оценка воспаления пародонта, М±SD
|
Показатели/группы |
Клиническая оценка воспалительного процесса, баллы |
Подвижность зубов, баллы |
Гистологическая оценка воспалительного процесса, баллы |
|
Контрольная группа |
0±0 |
0±0 |
0±0 |
|
Первая опытная группа до начала терапии |
2,89±0,61 р1=0,016 |
1,82±0,20 р1=0,016 |
2,95±0,22 р1=0,015 |
|
Первая опытная группа через 10 дней от начала терапии |
0,19±0,13 р1=0,011 р3=0,005 |
0,79±0,52 р1=0,011 р3=0,005 |
1,05±0,32 р1=0,01 р3=0,005 |
|
Вторая опытная до начала терапии |
2,90±0,57 р1=0,016 |
1,82±0,21 р1=0,016 |
2,97±0,20 р1=0,016 |
|
Третья опытная группа через 10 дней от начала терапии |
1,88±0,22 р1=0,012 р2=0,003 р3=0,016 |
1,51±0,17 р1=0,013 р2=0,008 р3=0,076 |
1,46±0,23 р1=0,011 р2=0,084 р3=0,007 |
|
Тест Крускал-Уоллиса |
Χ2=40,1, р<0,001 |
Χ2=37,1,р<0,001 |
Χ2=40,7, р<0,001 |
Примечание: р1 – уровень статистической значимости различий по сравнению с группой контроля, р2 – по сравнению с группой животных с экспериментальным пародонтитом, получающих плазмолифтинг, р3 – по сравнению с началом и окончанием терапии.
Крысы не страдают пародонтитом, поэтому методы индуцирования пародонтита у этого вида животных требуют или бактериальной инокуляции, или механического повреждения путем наложения лигатуры или как в нашем случае – отслойки пародонта, что приводит к воспалению десен и, в конечном итоге, к потере костной массы.
Основными компонентами богатой тромбоцитами плазмы являются: факторы роста, лейкоциты, фагоциты, нативный фибриноген, вазоактивные и хемотаксические агенты, а также высокая концентрация тромбоцитов. Концентрация тромбоцитов в ней в 3-4 раза выше концентрации по сравнению с их числом в кровотоке. Так, количество тромбоцитов в полученной плазме может превышать 2 000 000 в 1 мкл, в то время как нормальная концентрация тромбоцитов в крови составляет от 150 000 до 350 000 в 1 мкл.
Тромбоциты, выделяя факторы роста, привлекают недифференцированные мезенхимальные клетки в зону воспаления и активируя пролиферацию предшественников соединительной ткани, стимулируя активность фибробластов и остеобластов, а также ангиогенез, улучшают процесс заживления.
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что плазмолифтинг снижает воспалительную реакцию тканей, уменьшает подвижность зубов при экспериментальном пародонтите, что может быть опосредовано его противовоспалительными свойствами и влиянием на костный метаболизм.
Авторы: Фефелов А.А., Цыбиков Н.Н., Фефелова Е.В. (Краевая стоматологическая поликлиника г. Чита, ЧГМА, Россия)
Читайте также:
Статьи от брендов
0 комментариев